91麻豆精品一二三区在线,精品无码久久久久成人漫画,久久蜜桃精品av人妻,中国老熟妇自拍hd发布

咨詢熱線

15000266580

當前位置:首頁  >  技術文章  >  黑色素瘤細胞株在適宜條件下無限傳代

黑色素瘤細胞株在適宜條件下無限傳代

更新時間:2015-07-28      點擊次數(shù):3011
   黑色素瘤細胞株被定義為經原代培養(yǎng)的組織細胞,培養(yǎng)到第10代左右,度過*次死亡危機后的細胞群,這種細胞的遺傳物質沒有發(fā)生改變;細胞系則被定義為可以度過第二次死亡危機,傳代培養(yǎng)到40~50代的細胞,這部分細胞的遺傳物質發(fā)生了部分改變并且細胞帶有癌變的特點,這種細胞在適宜條件下無限傳代。
  產品目錄或者細胞說明書上的推薦的培養(yǎng)基一般是黑色素瘤細胞株的原始提供者推薦的培養(yǎng)基或者已經經過驗證的對該黑色素瘤細胞株zui合適的培養(yǎng)基,細胞對未推薦的培養(yǎng)基也許會適應,也有可能不適應。對于更換培養(yǎng)基,應謹慎對待,更換培養(yǎng)基時,應留一瓶細胞使用推薦的培養(yǎng)基培養(yǎng),留作種子。黑色素瘤細胞株更換培養(yǎng)基有兩種方法,zui簡單的方法是直接更換培養(yǎng)基,強制使細胞適應新的培養(yǎng)基;還有一種更溫和的方法:傳代細胞的時候分成細胞兩瓶,*瓶使用原來推薦的培養(yǎng)基,第二瓶使用50%原來推薦的培養(yǎng)基,50%新的培養(yǎng)基,之后仔細觀察細胞的生長狀態(tài),如果第二瓶細胞生長狀態(tài)不好,應立即停止更換培養(yǎng)基,如果第二瓶生長狀態(tài)好,黑色素瘤細胞株可以繼續(xù)傳代分瓶,一瓶使用50%原來推薦的培養(yǎng)基,50%新的培養(yǎng)基,另一瓶使用25%原來推薦的培養(yǎng)基,75%新的培養(yǎng)基,繼續(xù)觀察,如果細胞狀態(tài)好,可以全部換成新鮮的培養(yǎng)基。
  黑色素瘤細胞株的污染鑒定、預防和處理問題。普通微生物污染:培養(yǎng)基渾濁,高倍鏡觀察有微生物污染;按規(guī)定棄用并全面嚴格滅菌。支原體污染:顯微鏡無法觀察,依經驗表現(xiàn)為細胞生長緩慢,有細胞漂浮等等,應通過PCR 等方法鑒定,如發(fā)現(xiàn)支原體污染,應按規(guī)定棄用,實驗室要及時全面消毒滅菌,防止蔓延。(有些常規(guī)性細胞學實驗不受支原體污染影響,可以繼續(xù)使用細胞傳代,為防污染擴大蔓延,可以選擇性的在培養(yǎng)基中加入價的其它種抗生素,并在隔離實驗室操作和獨立使用一切用具與培養(yǎng)基等)。
  胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。黑色素瘤細胞株傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化貼壁細胞成單個細胞,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA 是一種二價離子的螯合劑,能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置,先用胰酶-EDTA 消化液清洗細胞(5.0 -10.0 ml/75cm),然后棄去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ,觀察黑色素瘤細胞株直到細胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要5-15分鐘,為了避免細胞成團,消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化,細胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化,血清中某些蛋白質能夠抑制胰酶的活性。一般情況下,離心并不需要。如果細胞需要無血清或者低血清的培養(yǎng)基,可以以125000g 轉速離心5分鐘,然后棄去中止用的培養(yǎng)基,加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞,移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞類型而定,一般是1:2-1:20,黑色素瘤細胞株具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產生損傷,對于這種類型的細胞,可用細胞刮輕輕刮下細胞,加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻細胞,然后進行傳代培養(yǎng)。
 
聯(lián)系方式

郵箱:xiangfbio@163.com

地址:上海市虹口區(qū)四平路710號7層

咨詢熱線

400-821-8510

(周一至周日9:00- 19:00)

在線咨詢
  • 掃一掃 微信咨詢

Copyright©2025 上海復祥生物科技有限公司 All Right Reserved    備案號:滬ICP備10013034號-2     sitemap.xml
技術支持:化工儀器網(wǎng)    管理登陸
日韩在线毛片| 开平市| 久久黄色影院| 欧洲另类二三四区| 国产香蕉一区二区三区| 久久久久夜色精品国产明星| 久久精品人人爽人人爽视色观看| 久久久久久AV无码免费网站| 深夜A级毛片催情精视频免费| 精品日产卡一卡二卡三入口 | 蜜臀AV性久久久久蜜臀AⅤ| 亚洲日本中文字幕乱码在线| 亚洲高清国产拍精品青青草原| 无码精品日韩中文字幕| 亚洲AV蜜桃永久无码精品 | 中文有码无码人妻在线| 四十如虎的丰满熟妇啪啪| 专干老肥熟女视频网站| 亚洲国产av高清无码| 亚洲AV超清无码不卡在线网络| 亚洲AV成人片无码网站| 香蕉视频在线精品视频| 亚洲最大无码中文字幕网站| 国产成人精品亚洲日本语言| 熟妇人妻中文a∨无码| 国产亚洲色视频在线| 国产精品成人一区二区三区 | 在线新版天堂资源中文www| 亚洲午夜福利av一区二区无码| 欧美高难度牲交视频| 欧美 国产 综合 欧美 视频| 久久久中日ab精品综合| 中文字幕丰满乱子无码视频| 国产片a国产片免费看视频 | 亚洲国产精品无码久久| 国产成人精品a视频| 久久99热精品免费观看| 国产精品厕所| 特别黄的视频免费播放| 国产精品久久久久久久| 国产一区91精品张津瑜|